pCold系列质粒

pCold III pColdIII 原核大肠杆菌蛋白表达载体温度诱导

发布时间:2018-05-28 11:25:56 | 浏览次数：

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pColdIII载体基本信息

载体名称:	pCold III, pColdIII, pCold-III
质粒类型:	大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:	高
启动子:	CSPA
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	4377 bp
5' 测序引物及序列:	pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3'
3' 测序引物及序列:	pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3'
载体抗性:	Ampicillin 氨苄
备注:	温度诱导，冷休克蛋白表达载体
稳定性:	瞬时表达 Transient
组成型:	诱导表达
病毒/非病毒:	非病毒

阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。

为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。

<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。

冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。

全序列

1 AAGGAATGGT GTGGCCGATT AATCATAAAT ATGAAAAATA ATTGTTGCAT CACCCGCCAA
61 TGCGTGGCTT AATGCACATC AAATTGTGAG CGGATAACAA TTTGATGTGC TAGCGCATAT
121 CCAGTGTAGT AAGGCAAGTC CCTTCAAGAG TTATCGTTGA TACCCCTCGT AGTGCACATT
181 CCTTTAACGC TTCAAAATCT GTAAAGCACG CCATATCGCC GAAAGGCACA CTTAATTATT
241 AAGAGGTAAT ACACCATGAA TCACAAAGTG CATATGGAGC TCGGTACCCT CGAGGGATCC
301 GAATTCAAGC TTGTCGACCT GCAGTCTAGA TAGGTAATCT CTGCTTAAAA GCACAGAATC
361 TAAGATCCCT GCCATTTGGC GGGGATTTTT TTATTTGTTT TCAGGAAATA AATAATCGAT
421 CGCGTAATAA AATCTATTAT TATTTTTGTG AAGAATAAAT TTGGGTGCAA TGAGAATGCG
481 CAGGCCCTTT CGTCTCGCGC GTTTCGGTGA TGACGGTGAA AACCTCTGAC ACATGCAGCT
541 CCCGGAGACG GTCACAGCTT GTCTGTAAGC GGATGCCGGG AGCAGACAAG CCCGTCAGGG
601 CGCGTCAGCG GGTGTTGGCG GGTGTCGGGG CTGGCTTAAC TATGCGGCAT CAGAGCAGAT
661 TGTACTGAGA GTGCACCATA AAATTGTAAA CGTTAATATT TTGTTAAAAT TCGCGTTAAA
721 TTTTTGTTAA ATCAGCTCAT TTTTTAACCA ATAGGCCGAA ATCGGCAAAA TCCCTTATAA
781 ATCAAAAGAA TAGCCCGAGA TAGGGTTGAG TGTTGTTCCA GTTTGGAACA AGAGTCCACT
841 ATTAAAGAAC GTGGACTCCA ACGTCAAAGG GCGAAAAACC GTCTATCAGG GCGATGGCCC
901 ACTACGTGAA CCATCACCCA AATCAAGTTT TTTGGGGTCG AGGTGCCGTA AAGCACTAAA
961 TCGGAACCCT AAAGGGAGCC CCCGATTTAG AGCTTGACGG GGAAAGCCGG CGAACGTGGC
1021 GAGAAAGGAA GGGAAGAAAG CGAAAGGAGC GGGCGCTAGG GCGCTGGCAA GTGTAGCGGT
1081 CACGCTGCGC GTAACCACCA CACCCGCCGC GCTTAATGCG CCGCTACAGG GCGCGTACTA
1141 TGGTTGCTTT GACGTATGCG GTGTGAAATA CCGCACAGAT GCGTAAGGAG AAAATACCGC
1201 ATCAGGCGTC AGGTGGCACT TTTCGGGGAA ATGTGCGCGG AACCCCTATT TGTTTATTTT
1261 TCTAAATACA TTCAAATATG TATCCGCTCA TGAGACAATA ACCCTGATAA ATGCTTCAAT
1321 AATATTGAAA AAGGAAGAGT ATGAGTATTC AACATTTCCG TGTCGCCCTT ATTCCCTTTT
1381 TTGCGGCATT TTGCCTTCCT GTTTTTGCTC ACCCAGAAAC GCTGGTGAAA GTAAAAGATG
1441 CTGAAGATCA GTTGGGTGCA CGAGTGGGTT ACATCGAACT GGATCTCAAC AGCGGTAAGA
1501 TCCTTGAGAG TTTTCGCCCC GAAGAACGTT TTCCAATGAT GAGCACTTTT AAAGTTCTGC
1561 TATGTGGCGC GGTATTATCC CGTATTGACG CCGGGCAAGA GCAACTCGGT CGCCGCATAC
1621 ACTATTCTCA GAATGACTTG GTTGAGTACT CACCAGTCAC AGAAAAGCAT CTTACGGATG
1681 GCATGACAGT AAGAGAATTA TGCAGTGCTG CCATAACCAT GAGTGATAAC ACTGCGGCCA
1741 ACTTACTTCT GACAACGATC GGAGGACCGA AGGAGCTAAC CGCTTTTTTG CACAACATGG
1801 GGGATCATGT AACTCGCCTT GATCGTTGGG AACCGGAGCT GAATGAAGCC ATACCAAACG
1861 ACGAGCGTGA CACCACGATG CCTGTAGCAA TGGCAACAAC GTTGCGCAAA CTATTAACTG
1921 GCGAACTACT TACTCTAGCT TCCCGGCAAC AATTAATAGA CTGGATGGAG GCGGATAAAG
1981 TTGCAGGACC ACTTCTGCGC TCGGCCCTTC CGGCTGGCTG GTTTATTGCT GATAAATCTG
2041 GAGCCGGTGA GCGTGGGTCT CGCGGTATCA TTGCAGCACT GGGGCCAGAT GGTAAGCCCT
2101 CCCGTATCGT AGTTATCTAC ACGACGGGGA GTCAGGCAAC TATGGATGAA CGAAATAGAC
2161 AGATCGCTGA GATAGGTGCC TCACTGATTA AGCATTGGTA ACTGTCAGAC CAAGTTTACT
2221 CATATATACT TTAGATTGAT TTAAAACTTC ATTTTTAATT TAAAAGGATC TAGGTGAAGA
2281 TCCTTTTTGA TAATCTCATG ACCAAAATCC CTTAACGTGA GTTTTCGTTC CACTGAGCGT
2341 CAGACCCCGT AGAAAAGATC AAAGGATCTT CTTGAGATCC TTTTTTTCTG CGCGTAATCT
2401 GCTGCTTGCA AACAAAAAAA CCACCGCTAC CAGCGGTGGT TTGTTTGCCG GATCAAGAGC
2461 TACCAACTCT TTTTCCGAAG GTAACTGGCT TCAGCAGAGC GCAGATACCA AATACTGTTC
2521 TTCTAGTGTA GCCGTAGTTA GGCCACCACT TCAAGAACTC TGTAGCACCG CCTACATACC
2581 TCGCTCTGCT AATCCTGTTA CCAGTGGCTG CTGCCAGTGG CGATAAGTCG TGTCTTACCG
2641 GGTTGGACTC AAGACGATAG TTACCGGATA AGGCGCAGCG GTCGGGCTGA ACGGGGGGTT
2701 CGTGCACACA GCCCAGCTTG GAGCGAACGA CCTACACCGA ACTGAGATAC CTACAGCGTG
2761 AGCTATGAGA AAGCGCCACG CTTCCCGAAG GGAGAAAGGC GGACAGGTAT CCGGTAAGCG
2821 GCAGGGTCGG AACAGGAGAG CGCACGAGGG AGCTTCCAGG GGGAAACGCC TGGTATCTTT
2881 ATAGTCCTGT CGGGTTTCGC CACCTCTGAC TTGAGCGTCG ATTTTTGTGA TGCTCGTCAG
2941 GGGGGCGGAG CCTATGGAAA AACGCCAGCA ACGCGGCCTT TTTACGGTTC CTGGCCTTTT
3001 GCTGGCCTTT TGCTCACATA GTCATGCCCC GCGCCCACCG GAAGGAGCTG ACTGGGTTGA
3061 AGGCTCTCAA GGGCATCGGT CGAGATCCCG GTGCCTAATG AGTGAGCTAA CTTACATTAA
3121 TTGCGTTGCG CTCACTGCCC GCTTTCCAGT CGGGAAACCT GTCGTGCCAG CTGCATTAAT
3181 GAATCGGCCA ACGCGCGGGG AGAGGCGGTT TGCGTATTGG GCGCCAGGGT GGTTTTTCTT
3241 TTCACCAGTG AGACGGGCAA CAGCTGATTG CCCTTCACCG CCTGGCCCTG AGAGAGTTGC
3301 AGCAAGCGGT CCACGCTGGT TTGCCCCAGC AGGCGAAAAT CCTGTTTGAT GGTGGTTAAC
3361 GGCGGGATAT AACATGAGCT GTCTTCGGTA TCGTCGTATC CCACTACCGA GATATCCGCA
3421 CCAACGCGCA GCCCGGACTC GGTAATGGCG CGCATTGCGC CCAGCGCCAT CTGATCGTTG
3481 GCAACCAGCA TCGCAGTGGG AACGATGCCC TCATTCAGCA TTTGCATGGT TTGTTGAAAA
3541 CCGGACATGG CACTCCAGTC GCCTTCCCGT TCCGCTATCG GCTGAATTTG ATTGCGAGTG
3601 AGATATTTAT GCCAGCCAGC CAGACGCAGA CGCGCCGAGA CAGAACTTAA TGGGCCCGCT
3661 AACAGCGCGA TTTGCTGGTG ACCCAATGCG ACCAGATGCT CCACGCCCAG TCGCGTACCG
3721 TCTTCATGGG AGAAAATAAT ACTGTTGATG GGTGTCTGGT CAGAGACATC AAGAAATAAC
3781 GCCGGAACAT TAGTGCAGGC AGCTTCCACA GCAATGGCAT CCTGGTCATC CAGCGGATAG
3841 TTAATGATCA GCCCACTGAC GCGTTGCGCG AGAAGATTGT GCACCGCCGC TTTACAGGCT
3901 TCGACGCCGC TTCGTTCTAC CATCGACACC ACCACGCTGG CACCCAGTTG ATCGGCGCGA
3961 GATTTAATCG CCGCGACAAT TTGCGACGGC GCGTGCAGGG CCAGACTGGA GGTGGCAACG
4021 CCAATCAGCA ACGACTGTTT GCCCGCCAGT TGTTGTGCCA CGCGGTTGGG AATGTAATTC
4081 AGCTCCGCCA TCGCCGCTTC CACTTTTTCC CGCGTTTTCG CAGAAACGTG GCTGGCCTGG
4141 TTCACCACGC GGGAAACGGT CTGATAAGAG ACACCGGCAT ACTCTGCGAC ATCGTATAAC
4201 GTTACTGGTT TCACATTCAC CACCCTGAAT TGACTCTCTT CCGGGCGCTA TCATGCCATA
4261 CCGCGAAAGG TTTTGCGCCA TTCGATGGTG TCCGGGATCT CGACGCTCTC CCTTATGCGA
4321 CTCCTGCATT AGGAAGCAGC CCAGTAGTAG GTTGAGGCCG TTGAGCACCG CCGCCGC