pCold系列质粒

Cold II pColdII 大肠杆菌蛋白表达载体温度诱导

发布时间:2018-05-28 11:25:49 | 浏览次数：

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pColdII载体基本信息

载体名称:	pCold II, pColdII, pCold-II
质粒类型:	大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平:	高
启动子:	CSPA
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	4392 bp
5' 测序引物及序列:	pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3'
3' 测序引物及序列:	pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3'
载体标签:	N-His,
载体抗性:	Ampicillin 氨苄
备注:	温度诱导，冷休克蛋白表达载体
稳定性:	瞬时表达 Transient
组成型:	诱导表达
病毒/非病毒:	非病毒

pColdII载体简介

阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。

为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。

<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。

冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。

全序列

1 AAGGAATGGT GTGGCCGATT AATCATAAAT ATGAAAAATA ATTGTTGCAT CACCCGCCAA
61 TGCGTGGCTT AATGCACATC AAATTGTGAG CGGATAACAA TTTGATGTGC TAGCGCATAT
121 CCAGTGTAGT AAGGCAAGTC CCTTCAAGAG TTATCGTTGA TACCCCTCGT AGTGCACATT
181 CCTTTAACGC TTCAAAATCT GTAAAGCACG CCATATCGCC GAAAGGCACA CTTAATTATT
241 AAGAGGTAAT ACACCATGAA TCACAAAGTG CATCATCATC ATCATCATAT GGAGCTCGGT
301 ACCCTCGAGG GATCCGAATT CAAGCTTGTC GACCTGCAGT CTAGATAGGT AATCTCTGCT
361 TAAAAGCACA GAATCTAAGA TCCCTGCCAT TTGGCGGGGA TTTTTTTATT TGTTTTCAGG
421 AAATAAATAA TCGATCGCGT AATAAAATCT ATTATTATTT TTGTGAAGAA TAAATTTGGG
481 TGCAATGAGA ATGCGCAGGC CCTTTCGTCT CGCGCGTTTC GGTGATGACG GTGAAAACCT
541 CTGACACATG CAGCTCCCGG AGACGGTCAC AGCTTGTCTG TAAGCGGATG CCGGGAGCAG
601 ACAAGCCCGT CAGGGCGCGT CAGCGGGTGT TGGCGGGTGT CGGGGCTGGC TTAACTATGC
661 GGCATCAGAG CAGATTGTAC TGAGAGTGCA CCATAAAATT GTAAACGTTA ATATTTTGTT
721 AAAATTCGCG TTAAATTTTT GTTAAATCAG CTCATTTTTT AACCAATAGG CCGAAATCGG
781 CAAAATCCCT TATAAATCAA AAGAATAGCC CGAGATAGGG TTGAGTGTTG TTCCAGTTTG
841 GAACAAGAGT CCACTATTAA AGAACGTGGA CTCCAACGTC AAAGGGCGAA AAACCGTCTA
901 TCAGGGCGAT GGCCCACTAC GTGAACCATC ACCCAAATCA AGTTTTTTGG GGTCGAGGTG
961 CCGTAAAGCA CTAAATCGGA ACCCTAAAGG GAGCCCCCGA TTTAGAGCTT GACGGGGAAA
1021 GCCGGCGAAC GTGGCGAGAA AGGAAGGGAA GAAAGCGAAA GGAGCGGGCG CTAGGGCGCT
1081 GGCAAGTGTA GCGGTCACGC TGCGCGTAAC CACCACACCC GCCGCGCTTA ATGCGCCGCT
1141 ACAGGGCGCG TACTATGGTT GCTTTGACGT ATGCGGTGTG AAATACCGCA CAGATGCGTA
1201 AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGTCAGGTG GCACTTTTCG GGGAAATGTG CGCGGAACCC
1261 CTATTTGTTT ATTTTTCTAA ATACATTCAA ATATGTATCC GCTCATGAGA CAATAACCCT
1321 GATAAATGCT TCAATAATAT TGAAAAAGGA AGAGTATGAG TATTCAACAT TTCCGTGTCG
1381 CCCTTATTCC CTTTTTTGCG GCATTTTGCC TTCCTGTTTT TGCTCACCCA GAAACGCTGG
1441 TGAAAGTAAA AGATGCTGAA GATCAGTTGG GTGCACGAGT GGGTTACATC GAACTGGATC
1501 TCAACAGCGG TAAGATCCTT GAGAGTTTTC GCCCCGAAGA ACGTTTTCCA ATGATGAGCA
1561 CTTTTAAAGT TCTGCTATGT GGCGCGGTAT TATCCCGTAT TGACGCCGGG CAAGAGCAAC
1621 TCGGTCGCCG CATACACTAT TCTCAGAATG ACTTGGTTGA GTACTCACCA GTCACAGAAA
1681 AGCATCTTAC GGATGGCATG ACAGTAAGAG AATTATGCAG TGCTGCCATA ACCATGAGTG
1741 ATAACACTGC GGCCAACTTA CTTCTGACAA CGATCGGAGG ACCGAAGGAG CTAACCGCTT
1801 TTTTGCACAA CATGGGGGAT CATGTAACTC GCCTTGATCG TTGGGAACCG GAGCTGAATG
1861 AAGCCATACC AAACGACGAG CGTGACACCA CGATGCCTGT AGCAATGGCA ACAACGTTGC
1921 GCAAACTATT AACTGGCGAA CTACTTACTC TAGCTTCCCG GCAACAATTA ATAGACTGGA
1981 TGGAGGCGGA TAAAGTTGCA GGACCACTTC TGCGCTCGGC CCTTCCGGCT GGCTGGTTTA
2041 TTGCTGATAA ATCTGGAGCC GGTGAGCGTG GGTCTCGCGG TATCATTGCA GCACTGGGGC
2101 CAGATGGTAA GCCCTCCCGT ATCGTAGTTA TCTACACGAC GGGGAGTCAG GCAACTATGG
2161 ATGAACGAAA TAGACAGATC GCTGAGATAG GTGCCTCACT GATTAAGCAT TGGTAACTGT
2221 CAGACCAAGT TTACTCATAT ATACTTTAGA TTGATTTAAA ACTTCATTTT TAATTTAAAA
2281 GGATCTAGGT GAAGATCCTT TTTGATAATC TCATGACCAA AATCCCTTAA CGTGAGTTTT
2341 CGTTCCACTG AGCGTCAGAC CCCGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTGA GATCCTTTTT
2401 TTCTGCGCGT AATCTGCTGC TTGCAAACAA AAAAACCACC GCTACCAGCG GTGGTTTGTT
2461 TGCCGGATCA AGAGCTACCA ACTCTTTTTC CGAAGGTAAC TGGCTTCAGC AGAGCGCAGA
2521 TACCAAATAC TGTTCTTCTA GTGTAGCCGT AGTTAGGCCA CCACTTCAAG AACTCTGTAG
2581 CACCGCCTAC ATACCTCGCT CTGCTAATCC TGTTACCAGT GGCTGCTGCC AGTGGCGATA
2641 AGTCGTGTCT TACCGGGTTG GACTCAAGAC GATAGTTACC GGATAAGGCG CAGCGGTCGG
2701 GCTGAACGGG GGGTTCGTGC ACACAGCCCA GCTTGGAGCG AACGACCTAC ACCGAACTGA
2761 GATACCTACA GCGTGAGCTA TGAGAAAGCG CCACGCTTCC CGAAGGGAGA AAGGCGGACA
2821 GGTATCCGGT AAGCGGCAGG GTCGGAACAG GAGAGCGCAC GAGGGAGCTT CCAGGGGGAA
2881 ACGCCTGGTA TCTTTATAGT CCTGTCGGGT TTCGCCACCT CTGACTTGAG CGTCGATTTT
2941 TGTGATGCTC GTCAGGGGGG CGGAGCCTAT GGAAAAACGC CAGCAACGCG GCCTTTTTAC
3001 GGTTCCTGGC CTTTTGCTGG CCTTTTGCTC ACATAGTCAT GCCCCGCGCC CACCGGAAGG
3061 AGCTGACTGG GTTGAAGGCT CTCAAGGGCA TCGGTCGAGA TCCCGGTGCC TAATGAGTGA
3121 GCTAACTTAC ATTAATTGCG TTGCGCTCAC TGCCCGCTTT CCAGTCGGGA AACCTGTCGT
3181 GCCAGCTGCA TTAATGAATC GGCCAACGCG CGGGGAGAGG CGGTTTGCGT ATTGGGCGCC
3241 AGGGTGGTTT TTCTTTTCAC CAGTGAGACG GGCAACAGCT GATTGCCCTT CACCGCCTGG
3301 CCCTGAGAGA GTTGCAGCAA GCGGTCCACG CTGGTTTGCC CCAGCAGGCG AAAATCCTGT
3361 TTGATGGTGG TTAACGGCGG GATATAACAT GAGCTGTCTT CGGTATCGTC GTATCCCACT
3421 ACCGAGATAT CCGCACCAAC GCGCAGCCCG GACTCGGTAA TGGCGCGCAT TGCGCCCAGC
3481 GCCATCTGAT CGTTGGCAAC CAGCATCGCA GTGGGAACGA TGCCCTCATT CAGCATTTGC
3541 ATGGTTTGTT GAAAACCGGA CATGGCACTC CAGTCGCCTT CCCGTTCCGC TATCGGCTGA
3601 ATTTGATTGC GAGTGAGATA TTTATGCCAG CCAGCCAGAC GCAGACGCGC CGAGACAGAA
3661 CTTAATGGGC CCGCTAACAG CGCGATTTGC TGGTGACCCA ATGCGACCAG ATGCTCCACG
3721 CCCAGTCGCG TACCGTCTTC ATGGGAGAAA ATAATACTGT TGATGGGTGT CTGGTCAGAG
3781 ACATCAAGAA ATAACGCCGG AACATTAGTG CAGGCAGCTT CCACAGCAAT GGCATCCTGG
3841 TCATCCAGCG GATAGTTAAT GATCAGCCCA CTGACGCGTT GCGCGAGAAG ATTGTGCACC
3901 GCCGCTTTAC AGGCTTCGAC GCCGCTTCGT TCTACCATCG ACACCACCAC GCTGGCACCC
3961 AGTTGATCGG CGCGAGATTT AATCGCCGCG ACAATTTGCG ACGGCGCGTG CAGGGCCAGA
4021 CTGGAGGTGG CAACGCCAAT CAGCAACGAC TGTTTGCCCG CCAGTTGTTG TGCCACGCGG
4081 TTGGGAATGT AATTCAGCTC CGCCATCGCC GCTTCCACTT TTTCCCGCGT TTTCGCAGAA
4141 ACGTGGCTGG CCTGGTTCAC CACGCGGGAA ACGGTCTGAT AAGAGACACC GGCATACTCT
4201 GCGACATCGT ATAACGTTAC TGGTTTCACA TTCACCACCC TGAATTGACT CTCTTCCGGG
4261 CGCTATCATG CCATACCGCG AAAGGTTTTG CGCCATTCGA TGGTGTCCGG GATCTCGACG
4321 CTCTCCCTTA TGCGACTCCT GCATTAGGAA GCAGCCCAGT AGTAGGTTGA GGCCGTTGAG
4381 CACCGCCGCC GC