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sgRNA构建建议教程
发布时间:2019-11-26 10:25:06 | 浏览次数:




sgRNA构建建议教程


1, 引物设计,https://crispr.cos.uni-heidelberg.de/

2, 引物退火,引物稀释到20nM,正反向引物分别取10ul混合,取0.5-1L水加热到沸腾,混合后引物放入,自然冷却到室温(2-4小时);

3, 酶切连接,取200ng质粒(不用太多,减少自连),取5ul退火的引物,T4连接酶和内切酶10×bufffer分别取0.5ul,ddH2O补到10ul

4, PCR仪器设置程序(时间紧张可以减少循环数或者减少循环内时间)

5, 产物用于转化;

6, PCR检测,用sgRNA引物,配合载体上引物PCR检测;

7, 送测序


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