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CRISPR/Cas13 是CRISPR/Cas9 系列新发现的一种核酸酶编辑系统，与Cas9 靶向DNA 不同，Cas13可特异性靶向RNA，实现对细胞内RNA的定点编辑、剪切调控、敲低和清除等。现已发现等多个Cas13 核酸酶，都可以靶向切割RNA，其中CasRx（RfxCas13d）特异性和切割效率最高，也是现在发现最小的VI 型CRISPR系统效应蛋白。CasRx靶向切割RNA时，目标RNA的两端无需PFSFS序列（protospacer flanking sequence，PFS；相当于Cas9针对DNA的PAM序列），因此可以更灵活的的设计sgRNA，几乎可靶向RNA的任何位置。相较于CRISPRi以及shRNA等基因沉默技术，CRISPR/CasRx系统显示有更高的靶向敲低效率和特异性，以及更低的脱靶效应，是更有优势的基因敲低工具。CasRx与NLS(核定位信号) 融合表达时定位于细胞核，能更及时高效敲低mRNA以及在细胞核内其他RNA。

pLV-U6-CasRxN-T2A-EGFP-IRES-Puro

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参考文献

ranscriptome Engineering with RNA-Targeting Type VI-D CRISPR Effectors. Konermann S, Lotfy P, Brideau NJ, Oki J, Shokhirev MN, Hsu PD. Cell. 2018 Mar 8. pii: S0092-8674(18)30207-1. doi: 10.1016/j.cell.2018.02.033. 10.1016/j.cell.2018.02.033 PubMed 29551272