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分子生物学实验室常用试剂的配制
发布时间:2020-11-23 11:03:29 | 浏览次数:


.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺(Spermidine: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate:将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml
牛血清蛋白(BSA:加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH5.2,再加水定容到100ml
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTANaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1gNa2EDTA·2H2O20gNaOH,并溶于水中,定容至1L
1mol/L HEPES将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOHpH6.8-8.2),然后用水定容至100ml
1mol/L HCl8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT溶解250mgIPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml
100mmol/L PMSF溶解174mgPMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶Kproteinase K:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNasefree RNase:溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/LTrisHClpH7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L
10SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol:溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml
100%三氯乙酸(TCA:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
2.5 Xgal5--4--3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mgXgal1ml的二甲基甲酰胺(DMF,用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂(Denhardt's regent
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量


2%聚蔗糖(Ficoll400型)
2%
聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40
2%BSA
(组分V

2g
2g
2g
加水至总体积为100ml


依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量


0.5mol/L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)
0.5mg/ml BSA
(组分V)(可选)

5ml 1mol/L
贮液
1ml 1mol/L
贮液
1ml 1mol/L
贮液
200ul 100 mmol/L
贮液
50ul 1 mmol/L
贮液
0.5ml 10 mg/mL
贮液
2.25ml


将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions
可以购买到100mmol/LdNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP
混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量


10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP

2ul 100 mmol/L dATP
贮液
2ul 100 mmol/L dCTP
贮液
2ul 100 mmol/L dGTP
贮液
2ul 100 mmol/L dTTP
贮液
12ul



20PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量


质量浓度为20%聚乙二醇
2.5mol/L
氯化钠

20g
50ml 5 mol/L
氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml


加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量


300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)
3mol/L
氯化钠

88.2g
175.3g
补足1L


溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH7.0,用水补足体积至1L

DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
100ul DEPC 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺(deionized formamide
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

磷酸缓冲液(phosphate buffer
按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L



1mol/L 磷酸二氢钠(ml
1mol/L
磷酸氢二钠(ml
最终pH





TE(用于悬浮和贮存DNA
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量


10mmol/L Tris-HCl
1mmol/L EDTA

1ml 1mol/L Tris-HCl
pH7.4-8.025℃)
200ul 0.5 mol/L EDTA
pH 8.0
98.8ml



Tris缓冲液(Tris-HCl buffer
121gTris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L



浓盐酸的体积(ml
pH





.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量


2mol/L Tris碱
1mol/L
乙酸
100 mmol/L EDTA

242g
57.1 ml
的冰乙酸(17.4 mol/L
200ml
0.5 mol/L EDTApH 8.0
补足1L



5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量


445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L
硼酸盐
10 mmol/L EDTA

54g
27.5g
硼酸
20 ml
0.5 mol/L EDTApH 8.0
补足1L



染料

1%溴酚蓝(bromophenol blue
1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1
%二甲苯青FFxylene cyanole FF
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。

凝胶上样液(gel loading solutions

 
碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18
%聚蔗糖(400型)
0.15
%溴甲酚绿
0.25
%二甲苯青FF

300ul 10N
氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA
pH8.0
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml



聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.15%溴酚蓝
0.15
%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15
%聚蔗糖(400型)
1.5ml 1
%溴酚蓝
1.5ml 1
%二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA
pH8.0
1.5g

补足到10ml




溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.25%溴酚蓝
0.25
%二甲苯青FF
15
%聚蔗糖(400型)

2.5ml 1
%溴酚蓝
2.5ml 1
%二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml





甘油凝胶上样液(4贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.15%溴酚蓝
0.15
%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
50
%甘油

1.5ml 1
%溴酚蓝
1.5ml 1
%二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA
pH8.0
3ml
3.9ml



蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.15%溴酚蓝
0.15
%二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40
%聚蔗糖

1.5ml 1
%溴酚蓝
1.5ml 1
%二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA
pH8.0
4g
补足到10ml



10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量


0.2%溴酚蓝
0.2
%二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1
SDS
50
%甘油

20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10
SDS
5ml
补足到10ml



.常用培养基

LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:


蛋白胨
10g
酵母提取物
5g
氯化钠
10g


如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L

SOB
培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:


蛋白胨
20g
酵母提取物
5g
氯化钠
0.5g
1 mol/L
氯化钾
2.5ml


用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC
培养基
成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。

TB
培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:


蛋白胨
12g
酵母提取物
24g
甘油
4ml


各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31gKH2PO412.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。

2×YT
培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:


蛋白胨
16g
酵母提取物
10g
氯化钠
4ml


如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L

YPD
培养基
将下列组分溶解在0.9L水中:


蛋白胨
20g
酵母提取物
10g
葡萄糖
20g


 


用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

.常用抗生素

氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林(methicillin)(100mg/ml
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素(streptomycin)(50mg/ml
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素(tetracyyline)(10mg/ml
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


 
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