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H1与U6
发布时间:2019-05-18 21:33:36 | 浏览次数:


H1与U6。
pSUPER RNAi系统的一个关键组成部分是H1 RNA聚合酶III启动子,它驱动内源性shRNA的产生。当其他RNAi载体系统使用U6启动子时,荷兰癌症研究所的研究表明H1比其他polIII启动子具有明显的优势。

POL III推进器的优势。
与大多数RNA pol III启动子不同的是,III型RNA pol III启动子不需要额外的序列元件,因此是siRNA体内传递系统的良好候选者。由III型RNA pol III启动子转录的最丰富的细胞RNA是U6小核RNA(在早产RNA的加工过程中起关键作用)、7SK RNA(RNA聚合酶II延伸因子TEFb的负调控因子)和H1 RNA(RNase P的一个组成部分)。

H1优势。
研究了4种不同的RNA聚合酶III启动子对由聚合酶II启动子驱动的异源基因表达的潜在负面影响。人HBV和7SK启动子对LGFP的表达无非特异性干扰,而鼠和人U6启动子对LGFP的表达有较强的干扰作用,在一定程度上,人U6启动子对LGFP的表达有较强的干扰作用。小鼠U6启动子的毒性已被证实。

此外,H1启动子为shRNA靶向设计提供了更大的灵活性。在大多数情况下,类U6启动子的+1核苷酸总是鸟苷,而H1启动子的+1核苷酸是腺苷。有趣的是,在H1表达的茎环序列中,将+1腺苷改变为尿苷、胞苷或鸟苷并不会影响基因沉默,这表明H1启动子在+1序列变化方面可能比U6启动子更灵活。

因此,在随后的实验中使用人类H1启动子来评估pSUPER RNAi系统的基因沉默潜力,并获得了非常成功的结果2,3。

稳定的shRNA或microRNA抑制。
pSUPER RNAi系统使研究人员能够进行长期实验,研究阻断细胞和整个有机体内特定蛋白质或微RNA的产生的效果,从而为防治艾滋病毒、癌症和其他遗传疾病等许多疾病提供新的治疗武器。

通过长达两个月或更长时间的沉默效应,这一新系统还释放了功能基因组学用于目标验证和药物发现的力量,这是基因对药物途径中的两个关键组成部分。

PSUPER遗产。
2002年4月,著名的“科学”杂志上发表了一篇论文,首次描述了最初的pSUPER矢量。它的影响如此之大,以至于收到了前所未有的1500项研究科学家的请求,要求在该载体被出售之前就获得该载体用于他们自己的研究。

因此,pSUPER载体正在成为世界各地实验室中shRNA、microRNA和X-miR microRNA抑制子的标准载体,为人们深入了解广泛的疾病-从阿尔茨海默氏症和帕金森氏症等神经退行性疾病,到艾滋病毒和肝炎等传染病,到癌症和其他基于基因的疾病-提供了深入的信息。

1。Tuschl,T.,“自然生物技术”20,446(2002)。
2。T.R.Brummelkamp,R.Bernard,和R Agami,Science 296,550(2002)。
3。T.R.Brummelkamp,R.Bernard,和R Agami,“癌细胞”2:3,243-247(2002年)
 
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